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色譜柱常見操作維護(hù)
更新時(shí)間:2014-11-11   點(diǎn)擊次數(shù):2505次

色譜柱常見操作維護(hù)
一、正確使用緩沖鹽  
緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑,因此緩沖鹽使用不當(dāng)會使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結(jié),柱壓上升;同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話:使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下:
1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱。
2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
注意:過渡流動相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動相相同,區(qū)別只是過渡流動相不含緩沖鹽。
3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法:
1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱。

二、防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時(shí)也會引起保留時(shí)間的變化,累積到一定程度時(shí)還會導(dǎo)致柱壓升高。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應(yīng),需要一定的時(shí)間才會體現(xiàn)出來,但對許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì),因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積,需要在每天的日常維護(hù)中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。 clin-lab.com
清洗方法:
1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。
2、使用過緩沖鹽:分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
3、補(bǔ)救方法:
水——乙氰——氯仿(或異丙醇)——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。
 

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